Faleminderit që vizituat www.chinacdoe.com.Versioni i shfletuesit që po përdorni ka mbështetje të kufizuar për CSS.Për përvojën më të mirë, ju rekomandojmë të përdorni një shfletues të përditësuar (ose çaktivizoni modalitetin e përputhshmërisë në Internet Explorer).Ndërkohë, për të siguruar mbështetje të vazhdueshme, ne do ta bëjmë faqen pa stile dhe JavaScript.
Sistemet laboratori në çip me aftësi në vend ofrojnë potencialin për diagnozë të shpejtë dhe të saktë dhe janë të dobishëm në mjedise me burime të kufizuara ku pajisjet biomjekësore dhe profesionistë të trajnuar nuk janë të disponueshme.Megjithatë, krijimi i një sistemi testimi në pikën e kujdesit që njëkohësisht ka të gjitha veçoritë e nevojshme për shpërndarjen shumëfunksionale, lëshimin sipas kërkesës, performancën e besueshme dhe ruajtjen afatgjatë të reagentëve mbetet një sfidë e madhe.Këtu ne përshkruajmë një teknologji të ndërprerësit të mikro-udhëtimit të aktivizuar me levë që mund të manipulojë lëngjet në çdo drejtim, të sigurojë përgjigje të saktë dhe proporcionale ndaj presionit të ajrit të aplikuar dhe të mbetet e qëndrueshme ndaj lëvizjeve dhe dridhjeve të papritura.Bazuar në teknologjinë, ne përshkruajmë gjithashtu zhvillimin e një sistemi të reaksionit zinxhir polimerazë që integron futjen, përzierjen dhe funksionet e reagimit të reagentëve të gjitha në një proces, i cili realizon performancën "kampion-në-përgjigje-jashtë" për të gjitha mostrat klinike të hundës nga 18 pacientë me Gripi dhe 18 kontrolle individuale, në përputhje të mirë të intensitetit të fluoreshencës me reaksionin standard zinxhir polimerazë (koeficientët Pearson > 0.9).Bazuar në teknologjinë, ne përshkruajmë gjithashtu zhvillimin e një sistemi të reaksionit zinxhir polimerazë që integron funksionet e futjes, përzierjes dhe reagimit të reagentëve të gjitha në një proces, i cili realizon performancën "kampion-në-përgjigje-jashtë" për të gjitha mostrat klinike të hundës nga 18 pacientë. me Influenza dhe 18 kontrolle individuale, në përputhje të mirë të intensitetit të fluoreshencës me reaksionin zinxhir standard të polimerazës (koeficientët Pearson > 0.9).Основываясь на этой технологии, мы также описываем разработку системы полимеразной цепной реакции, которая объединяет функции во образложения реагентов, смешивания и реакции во одном процессе, што обеспечивает выполноцение 18 pacientov me Gripp dhe 18 nga disa kontrolle, në horoshem sootvestvii intensively fluorescences with standardnoy polimeraznoy ceptnoy reaction (koefficentы Pirsona> 0,9).Bazuar në këtë teknologji, ne përshkruajmë gjithashtu zhvillimin e një sistemi të reaksionit zinxhir polimerazë që kombinon funksionet e injektimit, përzierjes dhe reagimit në një proces të vetëm, duke mundësuar marrjen e mostrës në përgjigje për të gjithë ekzemplarët klinikë të hundës nga 18 pacientë me grip.dhe 18 kontrolle individuale, në përputhje të mirë me intensitetin standard të fluoreshencës së reaksionit zinxhir polimerazë (koeficientët e Pearson > 0.9).Bazuar në këtë teknologji, ne përshkruajmë gjithashtu zhvillimin e një sistemi të reaksionit zinxhir polimerazë që integron funksionet e injektimit, përzierjes dhe reagimit të reagentëve për të analizuar të gjitha ekzemplarët klinikë të hundës nga 18 ekzemplarë të pacientëve të hundës në mostër. Influenca dhe 18 kontrolle individuale, intensiteti i fluoreshencës përputhet mirë me reaksion zinxhir standard polimerazë (koeficienti Pearson > 0.9).Platforma e propozuar garanton automatizim të besueshëm të analizave biomjekësore dhe kështu mund të përshpejtojë komercializimin e një sërë pajisjeve të testimit në pikën e kujdesit.
Sëmundjet e reja njerëzore, siç është pandemia COVID-19 e vitit 2020 që ka marrë jetën e miliona njerëzve, përbëjnë një kërcënim serioz për shëndetin global dhe qytetërimin njerëzor1.Zbulimi i hershëm, i shpejtë dhe i saktë i sëmundjeve është thelbësor për të kontrolluar përhapjen e virusit dhe për të përmirësuar rezultatet e trajtimit.Një ekosistem kryesor diagnostik i bazuar në laboratorë të centralizuar ku mostrat e testimit dërgohen në spitale ose klinika diagnostike dhe drejtohen nga profesionistë aktualisht po kufizon aksesin për gati 5.8 miliardë njerëz në mbarë botën, veçanërisht ata që jetojnë në mjedise të kufizuara nga burimet.ku mungojnë aparaturat e shtrenjta biomjekësore dhe specialistët e kualifikuar.klinicistët 2. Kështu, ekziston një nevojë urgjente për të zhvilluar një sistem laboratori në një çip të lirë dhe të lehtë për t'u përdorur me aftësinë e testimit në pikën e kujdesit (POCT) që mund t'u sigurojë klinicistëve informacion diagnostik në kohë për të marrë vendime të informuara për diagnozën .dhe trajtimi 3.
Udhëzimet e Organizatës Botërore të Shëndetësisë (OBSH) thonë se një POCT ideal duhet të jetë i përballueshëm, i përshtatshëm për t'u përdorur (i lehtë për t'u përdorur me trajnim minimal), i saktë (të shmangë negativët e rremë ose pozitivë të rremë), i shpejtë dhe i besueshëm (të sigurojë veti të mira përsëritshmërie) dhe i dorëzueshëm (i aftë për ruajtje afatgjatë dhe i disponueshëm lehtësisht për përdoruesit fundorë)4.Për të përmbushur këto kërkesa, sistemet POCT duhet të ofrojnë karakteristikat e mëposhtme: dozim i gjithanshëm për të reduktuar ndërhyrjen manuale, lëshim sipas kërkesës në transportin e reagentit në shkallë për rezultate të sakta të testit dhe performancë të besueshme për t'i bërë ballë dridhjeve mjedisore.Aktualisht, pajisja POCT më e përdorur është shiriti i rrjedhës anësore 5,6 i përbërë nga disa shtresa membranash poroze nitroceluloze që shtyjnë një sasi shumë të vogël kampioni përpara, duke reaguar me reagentët e para-immobilizuar me forcë kapilare.Megjithëse kanë avantazhin e kostos së ulët, lehtësinë e përdorimit dhe rezultateve të shpejta, pajisjet POCT të bazuara në shirita rrjedhës mund të përdoren vetëm për teste biologjike (p.sh. testet e glukozës7,8 dhe testet e shtatzënisë9,10) pa kërkuar analiza me shumë faza.reaksionet (p.sh. ngarkimi i reagentëve të shumtë, përzierja, multipleksimi).Për më tepër, forcat lëvizëse që kontrollojnë lëvizjen e lëngut (dmth. forcat kapilare) nuk sigurojnë qëndrueshmëri të mirë, veçanërisht midis grupeve, duke rezultuar në riprodhueshmëri të dobët11 dhe duke i bërë brezat e rrjedhës anësore kryesisht të dobishme për zbulim të mirë12,13.
Aftësitë e zgjeruara të prodhimit në shkallë mikro dhe nano kanë krijuar mundësi për zhvillimin e pajisjeve mikrofluidike POCT për matjet sasiore14,15,16,17.Duke rregulluar vetitë e ndërfaqes 18, 19 dhe gjeometrinë e kanaleve 20, 21, 22, mund të kontrollohet forca kapilare dhe shpejtësia e rrjedhës së këtyre pajisjeve.Megjithatë, besueshmëria e tyre, veçanërisht për lëngjet shumë të lagura, mbetet e papranueshme për shkak të pasaktësive të prodhimit, defekteve materiale dhe ndjeshmërisë ndaj dridhjeve mjedisore.Përveç kësaj, meqenëse një rrjedhje kapilar krijohet në ndërfaqen lëng-gaz, nuk mund të futet asnjë rrjedhë shtesë, veçanërisht pas mbushjes së kanalit mikrofluidik me lëng.Prandaj, për zbulim më kompleks, duhet të kryhen disa hapa të injektimit të mostrës24,25.
Ndër pajisjet mikrofluidike, pajisjet mikrofluidike centrifugale janë aktualisht një nga zgjidhjet më të mira për POCT26,27.Mekanizmi i tij lëvizës është i favorshëm në atë që forca lëvizëse mund të kontrollohet duke rregulluar shpejtësinë e rrotullimit.Megjithatë, disavantazhi është se forca centrifugale drejtohet gjithmonë drejt skajit të jashtëm të pajisjes, duke e bërë të vështirë zbatimin e reagimeve me shumë hapa të kërkuar për analiza më komplekse.Edhe pse forca shtytëse shtesë (p.sh. kapilarët 28, 29 dhe shumë të tjerë 30, 31, 32, 33, 34, 35) përveç forcës centrifugale janë futur për dozimin shumëfunksional, transferimi i paparashikuar i lëngut mund të ndodhë përsëri, sepse këto forca shtesë janë përgjithësisht të porosive. me përmasa më të ulëta se forca centrifugale, duke i bërë ato efektive vetëm në intervale të vogla funksionimi ose jo të disponueshme sipas kërkesës me lëshim të lëngshëm.Përfshirja e manipulimeve pneumatike në mikrofluidikë centrifugale siç janë metodat kinetike centrifugale 36, 37, 38, metodat termopneumatike 39 dhe metodat pneumatike aktive 40 është dëshmuar të jetë një alternativë tërheqëse.Me qasjen kundërfugodinamike, një zgavër shtesë dhe mikrokanale lidhëse integrohen në pajisje si për veprim të jashtëm ashtu edhe për atë të brendshëm, megjithëse efikasiteti i tij i pompimit (në rangun nga 75% në 90%) varet shumë nga numri i cikleve të pompimit dhe viskoziteti. të lëngut.Në metodën termopneumatike, membrana e lateksit dhe dhoma e transferimit të lëngjeve janë projektuar posaçërisht për të mbyllur ose rihapur hyrjen kur vëllimi i ajrit të bllokuar nxehet ose ftohet.Megjithatë, konfigurimi i ngrohjes/ftohjes paraqet probleme të reagimit të ngadalshëm dhe kufizon përdorimin e tij në analizat termosensitive (p.sh., amplifikimi i reaksionit zinxhir polimerazë (PCR)).Me një qasje pneumatike aktive, lëshimi sipas kërkesës dhe lëvizja brenda arrihen përmes aplikimit të njëkohshëm të presionit pozitiv dhe shpejtësive rrotulluese të përputhura saktësisht nga motorët me shpejtësi të lartë.Ka qasje të tjera të suksesshme duke përdorur vetëm aktivizues pneumatikë (presion pozitiv 41, 42 ose presion negativ 43) dhe modele normalisht të mbyllura të valvulave.Duke ushtruar presion të njëpasnjëshëm në dhomën pneumatike, lëngu pompohet përpara në mënyrë peristaltike dhe valvula e mbyllur normalisht parandalon kthimin e lëngut për shkak të peristaltikës, duke realizuar kështu operacione komplekse të lëngjeve.Megjithatë, aktualisht ka vetëm një numër të kufizuar teknologjish mikrofluidike që mund të kryejnë operacione komplekse të lëngjeve në një pajisje të vetme POCT, duke përfshirë shpërndarjen shumë-funksionale, lëshimin sipas kërkesës, performancën e besueshme, ruajtjen afatgjatë, trajtimin e lëngjeve me viskozitet të lartë, dhe prodhimi me kosto efektive.Të gjitha në të njëjtën kohë.Mungesa e një operacioni funksional me shumë hapa mund të jetë gjithashtu një nga arsyet pse vetëm disa produkte komerciale POCT si Cepheid, Binx, Visby, Cobas Liat dhe Rhonda janë prezantuar me sukses në tregun e hapur deri më sot.
Në këtë punim, ne propozojmë një aktivizues mikrofluidik pneumatik të bazuar në teknologjinë e mikroçelësave të unazave jeshile (FAST).FAST kombinon të gjitha vetitë e nevojshme në të njëjtën kohë për një gamë të gjerë reagentësh nga mikrolitra në mililitra.FAST përbëhet nga membrana, leva dhe blloqe elastike.Pa presionin e ajrit, membranat, levat dhe blloqet mund të mbyllen fort dhe lëngu brenda mund të ruhet për një kohë të gjatë.Kur aplikohet presioni i duhur dhe rregullohet në gjatësinë e levës, diafragma zgjerohet dhe e shtyn levën në pozicionin e hapur, duke lejuar që lëngu të kalojë.Kjo lejon matje shumëfunksionale të lëngjeve në një mënyrë kaskade, të njëkohshme, sekuenciale ose selektive.
Ne kemi zhvilluar një sistem PCR duke përdorur FAST për të gjeneruar rezultate përgjigjeje në mostër për zbulimin e viruseve të influencës A dhe B (IAV dhe IBV).Ne arritëm një kufi më të ulët zbulimi (LOD) prej 102 kopjesh/mL, analiza jonë multiplekse tregoi specifikë për IAV dhe IBV dhe lejoi patotipizimin e virusit të influencës.Rezultatet e testimit klinik duke përdorur mostrën e shtupës së hundës nga 18 pacientë dhe 18 individë të shëndetshëm tregojnë përputhshmëri të mirë në intensitetin e fluoreshencës me RT-PCR standarde (koeficientët Pearson > 0.9).Rezultatet e testimit klinik duke përdorur mostrën e shtupës së hundës nga 18 pacientë dhe 18 individë të shëndetshëm tregojnë përputhshmëri të mirë në intensitetin e fluoreshencës me RT-PCR standarde (koeficientët Pearson > 0.9).Rezuльтаты клинических испытаний со использованием образца мазка од носа од 18 pacientov dhe 18 zdorovыh liц poказывают хороее советување intensively флуоресценции стандартной ОТ-ПСОЦЕ >9,0 (0).Rezultatet e sprovave klinike duke përdorur një mostër të shtupës së hundës nga 18 pacientë dhe 18 individë të shëndetshëm tregojnë përputhje të mirë midis intensitetit të fluoreshencës së RT-PCR standarde (koeficientët e Pearson > 0.9).0.9 .. ............ Результаты клинических испытаний со использованием образцов назальных мазков nga 18 pacientov dhe 18 zdorovыh liц pokazuan më shumë interesa mezhdu intensivnostyyu флуоресценции и оценка на стандард, ПРОЦЕНТЕН ПРОЦЕНТЕН >9.Rezultatet e sprovave klinike duke përdorur ekzemplarë të shtupës së hundës nga 18 pacientë dhe 18 individë të shëndetshëm treguan përputhje të mirë midis intensitetit të fluoreshencës dhe RT-PCR standarde (koeficienti Pearson > 0.9).Kostoja e vlerësuar e materialit e një pajisjeje FAST-POCT është afërsisht 1 USD (Tabela plotësuese 1) dhe mund të reduktohet më tej duke përdorur metoda të prodhimit në shkallë të gjerë (p.sh. derdhja me injeksion).Në fakt, pajisjet POCT të bazuara në FAST kanë të gjitha veçoritë e nevojshme të mandatuara nga OBSH dhe janë të pajtueshme me metodat e reja të testimit biokimik, si p.sh. ciklimi termik i plazmës44, analizat imunologjike pa amplifikim45 dhe testet e funksionalizimit të nanotrupave46 që janë shtylla kurrizore e sistemeve POCT.mundësi.
Në fig.1a tregon strukturën e platformës FAST-POCT, e cila përbëhet nga katër dhoma të lëngshme: një dhomë para-ruajtjeje, një dhomë përzierjeje, një dhomë reagimi dhe një dhomë mbetjesh.Çelësi i kontrollit të rrjedhës së lëngut është dizajni FAST (i përbërë nga membrana, leva dhe blloqe elastike) të vendosura në dhomën e para-ruajtjes dhe dhomën e përzierjes.Si një metodë e aktivizuar në mënyrë pneumatike, dizajni FAST siguron kontroll të saktë të rrjedhës së lëngut, duke përfshirë ndërrimin e mbyllur/hapur, dozimin e gjithanshëm, lëshimin e lëngut sipas kërkesës, funksionimin e besueshëm (p.sh. pandjeshmëri ndaj dridhjeve mjedisore) dhe ruajtje afatgjatë.Platforma FAST-POCT përbëhet nga katër shtresa: një shtresë mbështetëse, një shtresë filmi elastik, një shtresë filmi plastik dhe një shtresë mbuluese, siç tregohet në një pamje të zmadhuar në Fig. 1b (treguar gjithashtu në detaje në figurat plotësuese S1 dhe S2 ).Të gjitha kanalet dhe dhomat e transportit të lëngjeve (të tilla si dhomat e para-ruajtjes dhe të reagimit) janë të ngulitura në substrate PLA (acid polilaktik) që variojnë nga 0,2 mm (pjesa më e hollë) deri në 5 mm të trasha.Materiali i filmit elastik është një PDMS me trashësi 300 µm që zgjerohet lehtësisht kur aplikohet presioni i ajrit për shkak të "trashësisë së hollë" dhe modulit të ulët të elasticitetit (rreth 2,25 MPa47).Shtresa e filmit polietileni është bërë nga polietileni tereftalat (PET) me një trashësi prej 100 µm për të mbrojtur filmin elastik nga deformimi i tepërt për shkak të presionit të ajrit.Në përputhje me dhomat, shtresa e nënshtresës ka leva të lidhura me shtresën e mbulimit (të bërë nga PLA) me anë të menteshave për të kontrolluar rrjedhën e lëngut.Filmi elastik u ngjit në shtresën mbështetëse duke përdorur shirit ngjitës të dyanshëm (ARseal 90880) dhe u mbulua me një film plastik.Tre shtresa u montuan në një nënshtresë duke përdorur një dizajn T-klipe në shtresën e mbulimit.Kapëse T ka një hendek midis dy këmbëve.Kur kapësja u fut në brazdë, të dy këmbët u përkulën pak, më pas u kthyen në gjendjen e tyre origjinale dhe e lidhën fort kapakun dhe pjesën e pasme ndërsa kalonin nëpër brazdë (Figura plotësuese S1).Më pas, të katër shtresat montohen duke përdorur lidhës.
Diagrami skematik i platformës që ilustron ndarjet e ndryshme funksionale dhe veçoritë e FAST.b Diagrami i zmadhuar i platformës FAST-POCT.c Foto e platformës pranë një monedhe çerek dollari amerikan.
Mekanizmi i punës së platformës FAST-POCT është paraqitur në Figurën 2. Komponentët kryesorë janë blloqet në shtresën bazë dhe menteshat në shtresën e mbulimit, gjë që rezulton në një dizajn interferenci kur të katër shtresat montohen duke përdorur një formë T .Kur nuk ushtrohet presion ajri (fig. 2a), përshtatja e ndërhyrjes bën që mentesha të përkulet dhe të deformohet, dhe një forcë mbyllëse zbatohet përmes levës për të shtypur filmin elastik kundër bllokut, dhe lëngu në zgavrën e vulës përcaktohet. si një gjendje e mbyllur.Duhet të theksohet se në këtë gjendje, leva është e përkulur nga jashtë, siç tregohet në pamjen anësore në Fig. 2a.Kur furnizohet me ajër (Fig. 2b), membrana elastike zgjerohet nga jashtë drejt kapakut dhe e shtyn levën lart, duke hapur kështu një hendek midis levës dhe bllokut që lëngu të rrjedhë në dhomën tjetër, e cila përcaktohet si një gjendje e hapur. .Pas çlirimit të presionit të ajrit, leva mund të kthehet në pozicionin e saj origjinal dhe të mbetet e shtrënguar për shkak të elasticitetit të menteshes.Videot e lëvizjeve të levës janë paraqitur në filmin plotësues S1.
A. Diagrami skematik dhe fotografitë kur mbyllen.Në mungesë të presionit, leva shtyp membranën kundër bllokut dhe lëngu mbyllet.b Në gjendje të mirë.Kur ushtrohet presion, membrana zgjerohet dhe e shtyn levën lart, kështu që kanali hapet dhe lëngu mund të rrjedhë.c Përcaktoni madhësinë karakteristike të presionit kritik.Dimensionet karakteristike përfshijnë gjatësinë e levës (L), distancën midis rrëshqitësit dhe menteshës (l) dhe trashësinë e zgjatjes së levës (t).Fs është forca e ngjeshjes në pikën e mbytjes B. q është ngarkesa e shpërndarë në mënyrë uniforme në levë.Tx* përfaqëson çift rrotullues të zhvilluar nga leva e varur.Presioni kritik është presioni i kërkuar për të ngritur levën dhe për të bërë që lëngu të rrjedhë.d Rezultatet teorike dhe eksperimentale të marrëdhënies ndërmjet presionit kritik dhe madhësisë së elementit.U kryen n = 6 eksperimente të pavarura dhe të dhënat tregohen si ± devijim standard.Të dhënat e papërpunuara paraqiten si skedarë të të dhënave të papërpunuara.
Një model analitik i bazuar në teorinë e rrezes është zhvilluar për të analizuar varësinë e presionit kritik Pc në të cilin hapet hendeku nga parametrat gjeometrikë (për shembull, L është gjatësia e levës, l është distanca midis bllokut dhe mentesha, S është leva Zona e kontaktit me lëngun t është trashësia e zgjatjes së levës , siç tregohet në Fig. 2c).Siç detajohet në shënimet plotësuese dhe figurën plotësuese S3, hendeku hapet kur \({P}_{c}\ge \frac{2{F}_{s}l}{SL}\), ku Fs është çift rrotullimi \ ({T}_{x}^{\ast}(={F}_{s}l)\) për të eliminuar forcat që lidhen me një përshtatje të ndërhyrjes dhe për të bërë që mentesha të përkulet.Përgjigja eksperimentale dhe modeli analitik tregojnë përputhje të mirë (Fig. 2d), duke treguar se presioni kritik Pc rritet me rritjen e t/l dhe zvogëlimin e L, gjë që shpjegohet lehtësisht nga modeli klasik i rrezes, pra çift rrotullimi rritet me t/Lift. .Kështu, analiza jonë teorike tregon qartë se presioni kritik mund të kontrollohet në mënyrë efektive duke rregulluar gjatësinë e levës L dhe raportin t/l, gjë që ofron një bazë të rëndësishme për hartimin e platformës FAST-POCT.
Platforma FAST-POCT ofron shpërndarje shumëfunksionale (treguar në Figurën 3a me futjen dhe eksperimentin), e cila është veçoria më e rëndësishme e POCT të suksesshme, ku lëngjet mund të rrjedhin në çdo drejtim dhe në çdo rend (kaskadë, të njëkohshme, sekuenciale) ose selektive shumëkanale. dispenzim .– funksioni i dozimit.Në fig.3a(i) tregon një mënyrë dozimi me kaskadë në të cilën dy ose më shumë dhoma janë kaskaduar duke përdorur blloqe për të ndarë reaktantët e ndryshëm dhe një levë për të kontrolluar gjendjet e hapura dhe të mbyllura.Kur ushtrohet presion, lëngu rrjedh nga dhoma e sipërme në atë të poshtme në një mënyrë kaskade.Duhet të theksohet se dhomat e kaskadës mund të mbushen me kimikate të lagura ose kimikate të thata si pluhurat e liofilizuar.Në eksperimentin në Fig. 3a(i), boja e kuqe nga dhoma e sipërme derdhet së bashku me pluhurin e ngjyrës blu (sulfati i bakrit) në dhomën e dytë dhe bëhet blu e errët kur arrin në dhomën e poshtme.Ai gjithashtu tregon presionin e kontrollit për lëngun që pompohet.Në mënyrë të ngjashme, kur një levë lidhet me dy dhoma, ajo bëhet modaliteti i njëkohshëm i injektimit, siç tregohet në fig.3a(ii), në të cilën lëngu mund të shpërndahet në mënyrë uniforme në dy ose më shumë dhoma kur ushtrohet presion.Meqenëse presioni kritik varet nga gjatësia e levës, gjatësia e levës mund të rregullohet për të arritur një model injektimi sekuencial siç tregohet në fig.3a (iii).Një levë e gjatë (me presion kritik Pc_long) u lidh me dhomën B dhe një levë e shkurtër (me presion kritik Pc_short > Pc_long) u lidh me dhomën A. Ndërsa u aplikua presioni P1 (Pc_long < P1 < Pc_short), vetëm lëngu me ngjyrë të kuqe mund të rrjedhë në dhomën B dhe kur presioni është rritur në P2 (> Pc_short), lëngu blu mund të rrjedhë në dhomën A. Kjo mënyrë injektimi sekuenciale zbatohet për lëngje të ndryshme që transferohen në dhomat e tyre përkatëse në sekuencë, gjë që është kritike për një POCT të suksesshëm pajisje.Një levë e gjatë (me presion kritik Pc_long) u lidh me dhomën B dhe një levë e shkurtër (me presion kritik Pc_short > Pc_long) u lidh me dhomën A. Ndërsa u aplikua presioni P1 (Pc_long < P1 < Pc_short), vetëm lëngu me ngjyrë të kuqe mund të rrjedhë në dhomën B dhe kur presioni është rritur në P2 (> Pc_short), lëngu blu mund të rrjedhë në dhomën A. Kjo mënyrë injektimi sekuenciale zbatohet për lëngje të ndryshme që transferohen në dhomat e tyre përkatëse në sekuencë, gjë që është kritike për një POCT të suksesshëm pajisje.Длинный рычаг (с критическим давлением Pc_long) был соединен со камерой B, а короткий рычаг (с критическим давлением Pc_short > Pc_long) был соединен со камерой A. Приложении Pc_1 (P сть, выделенная красным может течь в Камеру B, и когда давление было увеличено до P2 (> Pc_short), синяя жидкость може да течь во камеру A то имеет решающее значение для успешной POCT.Një levë e gjatë (me presion kritik Pc_long) u lidh me dhomën B dhe një levë e shkurtër (me presion kritik Pc_short > Pc_long) u lidh me dhomën A. Kur aplikohet presioni P1 (Pc_long < P1 < Pc_short), vetëm lëngu theksohet në të kuqe mund të rrjedhë në dhomën B dhe kur presioni është rritur në P2 (> Pc_short), lëngu blu mund të rrjedhë në dhomën A. Kjo mënyrë injektimi sekuencial zbatohet në lëngje të ndryshme të transferuara në mënyrë sekuenciale në dhomat përkatëse, gjë që është kritike për POCT të suksesshëm.pajisje. Dlinnыy rыchag (kritice davleние Pc_long) me kamerë B, a korotkiy rыchag (kritice davleние Pc_short > Pc_long) me kamerë A.Krahu i gjatë (presioni kritik Pc_long) është i lidhur me dhomën B dhe krahu i shkurtër (presioni kritik Pc_short > Pc_long) është i lidhur me dhomën A.Për të aplikuar të dhëna P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) në kamerën B mund të postupatь только красная жидкость, а при увеличении давления до P2 (> Pc_short) në kamerën A mund të postupatь синяя жидкость.Kur aplikohet presioni P1 (Pc_long < P1 < Pc_short), vetëm lëngu i kuq mund të hyjë në dhomën B, dhe kur presioni rritet në P2 (> Pc_short), lëngu blu mund të hyjë në dhomën A. Ky modalitet injektimi vijues është i përshtatshëm për transferimin sekuencial të lëngje të ndryshme në dhomat përkatëse, gjë që është kritike për funksionimin e suksesshëm të pajisjes POCT.Figura 3a(iv) tregon mënyrën selektive të injektimit, ku dhoma kryesore kishte një levë të shkurtër (me presion kritik Pc_short) dhe një levë të gjatë (me presion kritik Pc_long < Pc_short) që ishin të lidhura me dhomën A dhe dhomën B, përkatësisht, përveç kësaj. në një kanal tjetër ajri të lidhur me dhomën B. Për të transferuar lëngun në dhomën A fillimisht, presioni P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) dhe P2 (P2 > P1) me P1 + P2 > Pc_short u aplikuan në pajisje në të njëjtën kohë.Figura 3a(iv) tregon mënyrën selektive të injektimit, ku dhoma kryesore kishte një levë të shkurtër (me presion kritik Pc_short) dhe një levë të gjatë (me presion kritik Pc_long < Pc_short) që ishin të lidhura me dhomën A dhe dhomën B, përkatësisht, përveç kësaj. në një kanal tjetër ajri të lidhur me dhomën B. Për të transferuar lëngun në dhomën A fillimisht, presioni P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) dhe P2 (P2 > P1) me P1 + P2 > Pc_short u aplikuan në pajisje në të njëjtën kohë.Në fig.3а(iv) показан режим селективного впрыска, при котором основная камера имела короткий (с критическим давлением Pc_short) dhe длинный рычаг (с критическим давлением Pc_long < Pc_short), которые дополнително сомерой сомерой.3a(iv) tregon mënyrën selektive të injektimit, në të cilën dhoma kryesore kishte një levë të shkurtër (me presion kritik Pc_short) dhe një levë të gjatë (me presion kritik Pc_long < Pc_short), të cilat u lidhën gjithashtu me dhomën A dhe dhomën B, përkatësisht.к друго воздушному каналу, соединенному со камерой B. Чтобы сначала передать жидкость во kameru A, к устройству одновременно прикладывали давление P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) dhe P2 (P2 > P._short)në një kanal tjetër ajri të lidhur me dhomën B. Për të transferuar së pari lëngun në dhomën A, presionet P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) dhe P2 (P2 > P1) u aplikuan njëkohësisht në pajisje, ku P1 + P2 > Pc_short. 3а(iv) показан режим селективного впрыска, когда основная камера друго имеет короткий стержень (с критическим давлением Pc_short) и длинный стержень (с критическим давлением Pc_long < Pc_short) и соединойные со камено му канал, nënключенному к комнате B.3a(iv) tregon mënyrën selektive të injektimit kur dhoma kryesore ka një kërcell të shkurtër (presion kritik Pc_short) dhe një kërcell të gjatë (presion kritik Pc_long < Pc_short) të lidhur me dhomën A dhe dhomën B përkatësisht, dhe përveç një kalimi tjetër ajri, i lidhur me dhomën B.Kështu, P2 parandalon që lëngu të hyjë në dhomën B;ndërkohë, presioni total P1 + P2 e tejkaloi presionin kritik për të aktivizuar levën më të shkurtër të lidhur me dhomën A për të lejuar rrjedhjen e lëngut në dhomën A. Më pas, kur dhoma B kërkohej të mbushej, ne duhet të aplikojmë vetëm P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) në dhomën kryesore për të aktivizuar levën e gjatë dhe për të lejuar që lëngu të rrjedhë në dhomën B. Mund të vërehet qartë nga koha t = 3 s deri në 9 s që lëngu në dhomën A mbeti konstant ndërsa u rrit në dhomën B kur u aplikua presioni P1.ndërkohë, presioni total P1 + P2 e tejkaloi presionin kritik për të aktivizuar levën më të shkurtër të lidhur me dhomën A për të lejuar rrjedhjen e lëngut në dhomën A. Më pas, kur dhoma B kërkohej të mbushej, ne duhet të aplikojmë vetëm P1 (Pc_long < P1 < Pc_short) në dhomën kryesore për të aktivizuar levën e gjatë dhe për të lejuar që lëngu të rrjedhë në dhomën B. Mund të vërehet qartë nga koha t = 3 s deri në 9 s që lëngu në dhomën A mbeti konstant ndërsa u rrit në dhomën B kur u aplikua presioni P1.Между тем, общее давление P1 + P2 превысило критическое давление, чтобы активировать повеќе короткий рычаг, соединенный со камерой A, чтобы позволить жидкости течь в камеру можда только применить P1 (Pc_long < P1 < Pc_short ) në bazë të kamerës, chtobы aktivizoj длинный рычаг и дать жидкости течь во kameru B. Mund të jetë i vlefshëm, që në periudhën t = 3 deri në 9 me жидкость во kame A ka mbetur në kamerën e saj.Ndërkohë, presioni total P1 + P2 ka tejkaluar presionin kritik për të aktivizuar një levë më të shkurtër të lidhur me dhomën A për të lejuar që lëngu të rrjedhë në dhomën A. Më pas kur dhoma B duhet të mbushet, ne duhet të aplikojmë vetëm P1 (Pc_long < P1 < Pc_short ) në dhomën kryesore për të aktivizuar levën e gjatë dhe për të lënë lëngun të rrjedhë në dhomën B. Mund të vërehet qartë se midis t = 3 s dhe 9 s lëngu në dhomën A mbeti konstant, ndërsa në dhomën u rrit.B kur aplikohet presioni P1.Në të njëjtën kohë, presioni total P1 + P2 tejkalon presionin kritik, duke aktivizuar dhomën lidhëse të levës më të shkurtër A, duke lejuar që lëngu të rrjedhë në dhomën A.Kur është koha për të mbushur dhomën A, ne thjesht aplikojmë P1 në dhomën kryesore dhe P2 në dhomën dytësore.Në këtë mënyrë, sjellja e rrjedhës mund të ndërrohet në mënyrë selektive midis kamerave A dhe B. Sjellja e rrjedhës së katër mënyrave të shpërndarjes shumëfunksionale mund të gjendet në filmin shtesë S2.
një ilustrim i caktimit shumëfunksional, p.sh. (i) kaskadimi, (ii) i njëkohshëm, (iii) sekuencial dhe (iv) caktimi selektiv.Kurbat përfaqësojnë rrjedhën e punës dhe parametrat e këtyre katër mënyrave të shpërndarjes.b Rezultatet e testeve të ruajtjes afatgjatë në ujë të dejonizuar dhe etanol.U kryen n = 5 eksperimente të pavarura dhe të dhënat tregohen si ± sd c.Demonstrimet e testit të qëndrueshmërisë kur pajisja FAST dhe pajisja e valvulës kapilar (CV) ishin në (i) gjendje statike dhe (ii) vibruese.(iii) Vëllimi kundrejt kohës për pajisjet FAST dhe CV në frekuenca të ndryshme këndore.d Publikimi i rezultateve të testit sipas kërkesës për (i) pajisjen FAST dhe (ii) pajisjen CV.(iii) Marrëdhënia midis vëllimit dhe kohës për pajisjet FAST dhe CV që përdorin modalitetin e presionit të ndërprerë.Të gjitha shufrat e shkallës, 1 cm.Të dhënat e papërpunuara ofrohen si skedarë të të dhënave të papërpunuara.
Ruajtja afatgjatë e reagentëve është një tjetër veçori e rëndësishme e një pajisjeje të suksesshme POCT që do të lejojë personelin e patrajnuar të trajtojë reagentë të shumtë.Ndërsa shumë teknologji kanë treguar potencialin e tyre për ruajtje afatgjatë (p.sh., 35 mikrodispensera, 48 pako me blister dhe 49 pako me shkop), kërkohet një ndarje e dedikuar marrëse për të akomoduar paketën, e cila rrit koston dhe kompleksitetin;Për më tepër, këto mekanizma magazinimi nuk lejojnë shpërndarjen sipas kërkesës dhe rezultojnë në humbje të reagentëve për shkak të mbetjeve në paketim.Aftësia e ruajtjes afatgjatë u verifikua duke kryer një test të përshpejtuar të jetës duke përdorur material PMMA të përpunuar me CNC për shkak të ashpërsisë së tij të lehtë dhe rezistencës ndaj depërtimit të gazit (Figura plotësuese S5).Aparati i provës u mbush me ujë të dejonizuar (ujë të dejonizuar) dhe 70% etanol (reagentë simulues të avullueshëm) në 65°C për 9 ditë.Uji i dejonizuar dhe etanoli u ruajtën duke përdorur letër alumini për të bllokuar hyrjen nga lart.Ekuacioni Arrhenius dhe energjia e aktivizimit të depërtimit të raportuar në literaturë50,51 janë përdorur për të llogaritur ekuivalentin në kohë reale.Në fig.3b tregon rezultatet mesatare të humbjes së peshës për 5 mostra të ruajtura në 65°C për 9 ditë, ekuivalente me 0,30% për ujin e dejonizuar dhe 0,72% për 70% etanol për 2 vjet në 23°C.
Në fig.3c tregon testin e dridhjeve.Meqenëse valvula kapilar (CV) është metoda më e popullarizuar e trajtimit të lëngjeve midis pajisjeve ekzistuese POCT28,29, një pajisje CV 300 µm e gjerë dhe 200 µm e thellë është përdorur për krahasim.Mund të shihet se kur të dyja pajisjet mbeten të palëvizshme, lëngu në platformën FAST-POCT mbyllet dhe lëngu në pajisjen CV bllokohet për shkak të zgjerimit të papritur të kanalit, gjë që redukton forcat kapilar.Megjithatë, ndërsa frekuenca këndore e vibratorit orbital rritet, lëngu në platformën FAST-POCT mbetet i mbyllur, por lëngu në pajisjen CV derdhet në dhomën e poshtme (shih gjithashtu Filmi Suplementar S3).Kjo sugjeron që menteshat e deformueshme të platformës FAST-POCT mund të aplikojnë një forcë të fortë mekanike në modul për të mbyllur fort lëngun në dhomë.Megjithatë, në pajisjet CV, lëngu mbahet për shkak të ekuilibrit midis fazave të ngurta, ajrit dhe të lëngëta, duke krijuar paqëndrueshmëri dhe dridhjet mund të prishin ekuilibrin dhe të shkaktojnë sjellje të papritur të rrjedhës.Avantazhi i platformës FAST-POCT është se ofron funksionalitet të besueshëm dhe shmang dështimet në prani të dridhjeve që zakonisht ndodhin gjatë dorëzimit dhe funksionimit.
Një veçori tjetër e rëndësishme e platformës FAST-POCT është lëshimi i saj sipas kërkesës, i cili është një kërkesë kryesore për analizën sasiore.Në fig.3d krahason lëshimin sipas kërkesës së platformës FAST-POCT dhe pajisjes CV.Nga fig.3d(iii) shohim se pajisja FAST i përgjigjet shpejt sinjalit të presionit.Kur u bë presion në platformën FAST-POCT, lëngu rrodhi, kur presioni u lirua, rrjedha ndaloi menjëherë (Fig. 3d(i)).Ky veprim mund të shpjegohet me kthimin e shpejtë elastik të menteshës, i cili e shtyp levën mbrapa kundër bllokut, duke mbyllur dhomën.Megjithatë, lëngu vazhdoi të rrjedhë në pajisjen CV, duke rezultuar përfundimisht në një vëllim të papritur të lëngut prej përafërsisht 100 µl pasi u lirua presioni (Figura 3d(ii) dhe Filmi Suplementar S4).Kjo mund të shpjegohet me zhdukjen e efektit të fiksimit të kapilarëve pas njomjes së plotë të CV-së pas injektimit të parë.
Aftësia për të trajtuar lëngje me lagëshmëri dhe viskozitet të ndryshëm në të njëjtën pajisje mbetet një sfidë për aplikimet POCT.Lagështueshmëria e dobët mund të çojë në rrjedhje ose sjellje të tjera të papritura të rrjedhës në kanale, dhe pajisjet ndihmëse si miksera vorbullash, centrifuga dhe filtra shpesh kërkohen për të përgatitur lëngje shumë viskoze 52 .Ne testuam lidhjen midis presionit kritik dhe vetive të lëngut (me një gamë të gjerë lagështie dhe viskoziteti).Rezultatet janë paraqitur në Tabelën 1 dhe Video S5.Mund të shihet se lëngje me lagështi dhe viskozitet të ndryshëm mund të mbyllen në dhomë, dhe kur ushtrohet presion, edhe lëngje me viskozitet deri në 5500 cP mund të transferohen në dhomën ngjitur, duke bërë të mundur zbulimin e mostrave me të lartë viskoziteti (dmth sputum, një mostër shumë viskoze që përdoret për diagnostikimin e sëmundjeve të frymëmarrjes).
Duke kombinuar pajisjet e mësipërme shpërndarëse shumëfunksionale, mund të zhvillohet një gamë e gjerë pajisjesh POCT të bazuara në FAST.Një shembull është paraqitur në figurën 1. Impianti përmban një dhomë para-magazinimi, një dhomë përzierjeje, një dhomë reagimi dhe një dhomë mbetjesh.Reagentët mund të ruhen në dhomën e para-ruajtjes për periudha të gjata kohore dhe më pas të shkarkohen në dhomën e përzierjes.Me presionin e duhur, reaktantët e përzier mund të transferohen në mënyrë selektive në një dhomë mbetjesh ose në një dhomë reagimi.
Për shkak se zbulimi PCR është standardi i artë për zbulimin e patogjenëve si H1N1 dhe COVID-19 dhe përfshin hapa të shumëfishtë reagimi, ne përdorëm platformën FAST-POCT për zbulimin PCR si një aplikim.Në fig.4 tregon procesin e testimit PCR duke përdorur platformën FAST-POCT.Së pari, reagjenti eluent, reagjenti i mikroruzave magnetike, tretësira e larjes A dhe tretësira e larjes W u futën me pipetë në dhomat e para-ruajtjes E, M, W1 dhe W2, përkatësisht.Fazat e adsorbimit të ARN-së janë paraqitur në fig.4a dhe janë si më poshtë: (1) kur aplikohet presioni P1 (=0,26 bar), kampioni lëviz në dhomën M dhe shkarkohet në dhomën e përzierjes.(2) Presioni i ajrit P2 (= 0,12 bar) furnizohet përmes portës A të lidhur me pjesën e poshtme të dhomës së përzierjes.Megjithëse një numër metodash përzierjeje kanë treguar potencialin e tyre në përzierjen e lëngjeve në platformat POCT (p.sh. përzierja serpentine 53, përzierja e rastësishme 54 dhe përzierja e grupit 55), efikasiteti dhe efektiviteti i tyre i përzierjes nuk janë ende të kënaqshme.Ai miraton metodën e përzierjes së flluskave, në të cilën ajri futet në fund të dhomës së përzierjes për të krijuar flluska në lëng, pas së cilës vorbulla e fuqishme mund të arrijë përzierjen e plotë brenda sekondave.Eksperimentet e përzierjes së flluskave janë kryer dhe rezultatet janë paraqitur në figurën plotësuese S6.Mund të shihet se kur ushtrohet një presion prej 0,10 bar, përzierja e plotë zgjat rreth 8 sekonda.Me rritjen e presionit në 0,20 bar, arrihet përzierja e plotë në rreth 2 sekonda.Metodat për llogaritjen e efikasitetit të përzierjes janë paraqitur në seksionin Metodat.(3) Përdorni një magnet rubidium për të nxjerrë rruazat, më pas shtypni P3 (= 0,17 bar) përmes portës P për të zhvendosur reagentët në dhomën e mbetjeve.Në fig.4b,c tregon hapat e larjes për të hequr papastërtitë nga kampioni si më poshtë: (1) Tretësira larëse A nga dhoma W1 derdhet në dhomën e përzierjes me presion P1.(2) Më pas bëni procesin e përzierjes së flluskave.(3) Tretësira larëse A transferohet në dhomën e lëngut të mbeturinave dhe mikrorruazat në dhomën e përzierjes tërhiqen nga magneti.Larja W (Fig. 4c) ishte e ngjashme me larjen A (Fig. 4b).Duhet të theksohet se çdo hap larje A dhe W është kryer dy herë.Figura 4d tregon hapat e elucionit për të elutuar ARN-në nga rruazat;hapat e futjes së elucionit dhe përzierjes janë të njëjta me hapat e adsorbimit dhe larjes së ARN-së të përshkruar më sipër.Ndërsa reagjentët e elucionit transferohen në dhomën e reagimit PCR nën presionet P3 dhe P4 (=0,23 bar), presioni kritik arrihet për të mbyllur krahun e dhomës së reagimit PCR.Në mënyrë të ngjashme, presioni P4 gjithashtu ndihmon në mbylljen e kalimit në dhomën e mbeturinave.Kështu, të gjithë reagjentët e elucionit u shpërndanë në mënyrë të barabartë midis katër dhomave të reagimit PCR për të filluar reaksionet multiplekse PCR.Procedura e mësipërme është paraqitur në filmin plotësues S6.
Në hapin e adsorbimit të ARN-së, kampioni futet në hyrjen M dhe injektohet në dhomën e përzierjes së bashku me tretësirën e rruazës së ruajtur më parë.Pas përzierjes dhe heqjes së kokrrizave, reagentët shpërndahen në dhomën e mbetjeve.b dhe c hapat e larjes, futni në dhomën e përzierjes reagentë të ndryshëm larës të ruajtur paraprakisht dhe pas përzierjes dhe heqjes së rruazave, transferoni reagentët në dhomën e lëngjeve të mbeturinave.d Hapi i elucionit: Pas futjes së reagentëve të elucionit, përzierjes dhe nxjerrjes së rruazës, reagentët transferohen në dhomën e reaksionit PCR.Kurbat tregojnë rrjedhën e punës dhe parametrat përkatës të fazave të ndryshme.Presioni është presioni i ushtruar nëpër dhomat individuale.Vëllimi është vëllimi i lëngut në dhomën e përzierjes.Të gjitha shufrat e shkallës janë 1 cm.Të dhënat e papërpunuara ofrohen si skedarë të të dhënave të papërpunuara.
Është kryer një procedurë testimi PCR dhe Figura plotësuese S7 paraqet profile termike duke përfshirë 20 minuta kohë të transkriptimit të kundërt dhe 60 minuta kohë të ciklit termik (95 dhe 60 °C), me një cikël termik 90 s (Filmi Suplementar S7)..FAST-POCT kërkon më pak kohë për të përfunduar një cikël termik (90 sekonda) sesa RT-PCR konvencionale (180 sekonda për një cikël termik).Kjo mund të shpjegohet nga raporti i lartë i sipërfaqes ndaj vëllimit dhe inercia e ulët termike e dhomës së reaksionit mikro-PCR.Sipërfaqja e dhomës është 96.6 mm2 dhe vëllimi i dhomës është 25 mm3, duke e bërë raportin sipërfaqe ndaj vëllimit afërsisht 3.86.Siç shihet në figurën plotësuese S10, zona e provës PCR e platformës sonë ka një brazdë në panelin e pasmë, duke e bërë pjesën e poshtme të dhomës PCR të trashë 200 µm.Një jastëk elastik përçues termik është ngjitur në sipërfaqen e ngrohjes të kontrolluesit të temperaturës, duke siguruar kontakt të ngushtë me pjesën e pasme të kutisë së provës.Kjo redukton inercinë termike të platformës dhe përmirëson efikasitetin e ngrohjes/ftohjes.Gjatë ciklit termik, parafina e ngulitur në platformë shkrihet dhe derdhet në dhomën e reagimit PCR, duke vepruar si një izolues për të parandaluar avullimin e reagentit dhe ndotjen e mjedisit (shih Filmi S8 shtesë).
Të gjitha proceset e zbulimit të PCR të përshkruara më sipër u automatizuan plotësisht duke përdorur një instrument FAST-POCT të bërë me porosi, i përbërë nga një njësi e programuar e kontrollit të presionit, një njësi ekstraktimi magnetik, një njësi kontrolli të temperaturës dhe një njësi për kapjen dhe përpunimin e sinjaleve fluoreshente.Vlen të përmendet, ne përdorëm platformën FAST-POCT për izolimin e ARN-së dhe më pas përdorëm mostrat e ARN-së së nxjerrë për reaksionet PCR duke përdorur sistemin FAST-POCT dhe sistemin PCR desktop për krahasim.Rezultatet ishin pothuajse të njëjta me atë të paraqitur në figurën plotësuese S8.Operatori kryen një detyrë të thjeshtë: fut kampionin në dhomën M dhe fut platformën në instrument.Rezultatet sasiore të testit janë në dispozicion në rreth 82 minuta.Informacioni i detajuar rreth mjeteve FAST-POCT mund të gjendet në figurën shtesë.C9, C10 dhe C11.
Gripi i shkaktuar nga viruset e influencës A (IAV), B (IBV), C (ICV) dhe D (IDV) është një fenomen i zakonshëm global.Nga këto, IAV dhe IBV janë përgjegjës për rastet më të rënda dhe epidemitë sezonale, duke infektuar 5-15% të popullsisë së botës, duke shkaktuar 3-5 milionë raste të rënda dhe duke shkaktuar 290,000-650,000 vdekje në vit.Sëmundjet e frymëmarrjes56,57.Diagnoza e hershme e IAV dhe IB është thelbësore për të reduktuar sëmundshmërinë dhe barrën ekonomike shoqëruese.Ndër teknikat diagnostike të disponueshme, reaksioni zinxhir i polimerazës së transkriptazës së kundërt (RT-PCR) konsiderohet më i ndjeshëm, specifik dhe i saktë (>99%)58,59.Ndër teknikat diagnostike të disponueshme, reaksioni zinxhir i polimerazës së transkriptazës së kundërt (RT-PCR) konsiderohet më i ndjeshëm, specifik dhe i saktë (>99%)58,59.Metoda e Mesme доступных диагностических полимеразная цепная реакция со обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) считается наиболее чувствительной, specifically dhe saktëй (> 99%)58,59.Ndër metodat e disponueshme diagnostike, reaksioni zinxhir i polimerazës së transkriptazës së kundërt (RT-PCR) konsiderohet më i ndjeshëm, specifik dhe i saktë (> 99%)58,59. Sipas metodës së saktë të diagnozës, полимеразная цепная реакция со обратной транскриптазой (ОТ-ПЦР) считается наиболее чувствительной, specifically dhe saktëй (>99%)58,59.Nga metodat e disponueshme diagnostike, reaksioni zinxhir i polimerazës së transkriptazës së kundërt (RT-PCR) konsiderohet më i ndjeshëm, specifik dhe i saktë (>99%)58,59.Megjithatë, metodat tradicionale RT-PCR kërkojnë tubim të përsëritur, përzierjen, shpërndarjen dhe transferimin e lëngjeve, duke kufizuar përdorimin e tyre nga profesionistët në mjedise me burime të kufizuara.Këtu, platforma FAST-POCT është përdorur për zbulimin PCR të IAV dhe IBV, përkatësisht, për të marrë kufirin e tyre të poshtëm të zbulimit (LOD).Përveç kësaj, IAV dhe IBV janë shumëfishuar për të diskriminuar midis patotipeve të ndryshme midis specieve, duke ofruar një platformë premtuese për analizën gjenetike dhe aftësinë për të trajtuar me saktësi sëmundjen.
Në fig.5a tregon rezultatet e testimit HAV PCR duke përdorur 150 µl të ARN virale të pastruar si mostër.Në fig.5a(i) tregon se në një përqendrim të HAV prej 106 kopje/ml, intensiteti i fluoreshencës (ΔRn) mund të arrijë 0,830 dhe kur përqendrimi reduktohet në 102 kopje/ml, ΔRn mund të arrijë ende 0,365, që korrespondon me më të lartë se kaq. e grupit të kontrollit negativ bosh (0.002), rreth 100 herë më i lartë.Për përcaktimin sasior bazuar në gjashtë eksperimente të pavarura, u krijua një kurbë kalibrimi linear midis përqendrimit log dhe pragut të ciklit (Ct) të IAV (Fig. 5a(ii)), R2 = 0,993, duke filluar nga 102-106 kopje/mL.rezultatet janë në përputhje të mirë me metodat konvencionale RT-PCR.Në fig.5a(iii) tregon imazhe fluoreshente të rezultateve të testit pas 40 cikleve të platformës FAST-POCT.Ne zbuluam se platforma FAST-POCT mund të zbulojë HAV deri në 102 kopje/mL.Megjithatë, metoda tradicionale nuk ka një vlerë Ct në 102 kopje/mL, duke e bërë atë një LOD prej rreth 103 kopje/mL.Ne supozuam se kjo mund të jetë për shkak të efikasitetit të lartë të përzierjes së flluskave.Eksperimentet e testit PCR u kryen në ARN të pastruar të IAV-së për të vlerësuar metoda të ndryshme përzierjeje, duke përfshirë përzierjen e tundjes (e njëjta metodë përzierjeje si në operacionin konvencional RT-PCR), përzierjen me shishkë (kjo metodë, 3 s në 0,12 bar) dhe pa përzierje si grup kontrolli ..Rezultatet mund të gjenden në figurën plotësuese S12.Mund të shihet se në një përqendrim më të lartë të ARN-së (106 kopje/mL), vlerat e Ct të metodave të ndryshme të përzierjes janë pothuajse të njëjta si për përzierjen me flluska.Kur përqendrimi i ARN-së ra në 102 kopje/mL, përzierja e tundjes dhe kontrollet nuk kishin vlera Ct, ndërsa metoda e përzierjes me flluska jepte ende një vlerë Ct prej 36.9, e cila ishte nën pragun Ct prej 38. Rezultatet tregojnë një karakteristikë dominuese të përzierjes vezikulat, gjë që është demonstruar edhe në literaturë të tjera, gjë që mund të shpjegojë gjithashtu pse ndjeshmëria e platformës FAST-POCT është pak më e lartë se RT-PCR konvencionale.Në fig.5b tregon rezultatet e analizës PCR të mostrave të ARN të pastruar të IBV që variojnë nga 101 në 106 kopje/ml.Rezultatet ishin të ngjashme me testin IAV, duke arritur një R2 = 0,994 dhe një LOD prej 102 kopje/mL.
një analizë PCR e virusit të influencës A (IAV) me përqendrime IAV që variojnë nga 106 në 101 kopje/mL duke përdorur tampon TE si një kontroll negativ (NC).(i) Kurba e fluoreshencës në kohë reale.(ii) Kurba lineare e kalibrimit midis përqendrimit logaritmik të IAV ARN dhe pragut të ciklit (Ct) për metodat e testimit FAST dhe konvencionale.(iii) Imazhi fluoreshente IAV FAST-POCT pas 40 cikleve.b, zbulimi PCR i virusit të influencës B (IBV) me (i) spektrin e fluoreshencës në kohë reale.(ii) Lakorja e kalibrimit linear dhe (iii) imazhi i fluoreshencës FAST-POCT IBV pas 40 cikleve.Kufiri i poshtëm i zbulimit (LOD) për IAV dhe IBV duke përdorur platformën FAST-POCT ishte 102 kopje/mL, që është më i ulët se metodat konvencionale (103 kopje/mL).c Rezultatet e testit multiplex për IAV dhe IBV.GAPDH u përdor si një kontroll pozitiv dhe buferi TE u përdor si një kontroll negativ për të parandaluar kontaminimin e mundshëm dhe amplifikimin e sfondit.Mund të dallohen katër lloje të ndryshme mostrash: (1) mostra negative vetëm me GAPDH (“IAV-/IBV-”);(2) Infeksioni IAV (“IAV+/IBV-”) me IAV dhe GAPDH;(3) Infeksioni IBV (“IAV-/IBV+”) me IBV dhe GAPDH;(4) Infeksioni IAV/IBV (“IAV+/IBV+”) me IAV, IBV dhe GAPDH.Vija me pika përfaqëson vijën e pragut.Janë kryer n = 6 eksperimente biologjikisht të pavarura, të dhënat tregohen si ± devijim standard.Të dhënat e papërpunuara paraqiten si skedarë të të dhënave të papërpunuara.
Në fig.5c tregon rezultatet e testit të multipleksimit për IAV/IBV.Këtu, lizati i virusit u përdor si një zgjidhje mostër në vend të ARN-së së pastruar dhe katër abetare për IAV, IBV, GAPDH (kontroll pozitiv) dhe bufer TE (kontroll negativ) u shtuan në katër dhoma të ndryshme reagimi të platformës FAST-POCT.Kontrollet pozitive dhe negative përdoren këtu për të parandaluar kontaminimin e mundshëm dhe përmirësimin e sfondit.Testet u ndanë në katër grupe: (1) Mostrat GAPDH-negative (“IAV-/IBV-”);(2) IAV-infektuar (“IAV+/IBV-”) kundrejt IAV dhe GAPDH;(3) IBV-.të infektuar (“IAV-”) -/IBV+”) IBV dhe GAPDH;(4) Infeksioni IAV/IBV (“IAV+/IBV+”) me IAV, IBV dhe GAPDH.Në fig.5c tregon se kur u aplikuan mostrat negative, intensiteti i fluoreshencës ΔRn i dhomës së kontrollit pozitiv ishte 0.860, dhe ΔRn i IAV dhe IBV ishte i ngjashëm me kontrollin negativ (0.002).Për grupet IAV+/IBV-, IAV-/IBV+ dhe IAV+/IBV+, kamerat IAV/GAPDH, IBV/GAPDH dhe IAV/IBV/GAPDH treguan respektivisht intensitet të konsiderueshëm fluoreshence, ndërsa kamerat e tjera madje treguan intensitet fluoreshence në sfond niveli 40 pas ciklit termik.Nga testet e mësipërme, platforma FAST-POCT tregoi specifikë të jashtëzakonshme dhe na lejoi të patotipizonim njëkohësisht viruse të ndryshëm të gripit.
Për të vërtetuar zbatueshmërinë klinike të FAST-POCT, ne testuam 36 ekzemplarë klinikë (mostra të shtupës së hundës) nga pacientë me IB (n=18) dhe kontrolle jo-IB (n=18) (Figura 6a).Informacioni i pacientit është paraqitur në Tabelën Suplementare 3. Statusi i infeksionit IB u konfirmua në mënyrë të pavarur dhe protokolli i studimit u miratua nga Spitali i Parë i Universitetit Zhejiang (Hangzhou, Zhejiang).Çdo mostër e pacientëve u nda në dy kategori.Njëra u përpunua duke përdorur FAST-POCT dhe tjetra u përpunua duke përdorur një sistem PCR desktop (SLAN-96P, Kinë).Të dy analizat përdorin të njëjtat komplete pastrimi dhe zbulimi.Në fig.6b tregon rezultatet e FAST-POCT dhe PCR konvencionale të transkriptimit të kundërt (RT-PCR).Ne krahasuam intensitetin e fluoreshencës (FAST-POCT) me -log2 (Ct), ku Ct është pragu i ciklit për RT-PCR konvencionale.Kishte një marrëveshje të mirë midis dy metodave.FAST-POCT dhe RT-PCR treguan një korrelacion të fortë pozitiv me një vlerë të raportit Pearson (r) prej 0.90 (Figura 6b).Më pas vlerësuam saktësinë diagnostike të FAST-POCT.Shpërndarjet e intensitetit të fluoreshencës (FL) për mostrat pozitive dhe negative u siguruan si një masë analitike e pavarur (Fig. 6c).Vlerat e FL ishin dukshëm më të larta në pacientët me IB sesa në kontrollet (****P = 3,31 × 10-19; T-test me dy bisht) (Fig. 6d).Më pas, u vizatuan kurbat e karakteristikave të funksionimit të marrësit IBV (ROC).Ne zbuluam se saktësia diagnostike ishte shumë e mirë, me një zonë nën kurbën prej 1 (Fig. 6e).Ju lutemi vini re se për shkak të porositjes së detyrueshme të maskës në Kinë për shkak të COVID-19 që nga viti 2020, ne nuk kemi identifikuar pacientë me IBD, kështu që të gjitha ekzemplarët klinikë pozitivë (d.m.th., mostrat e shtupës së hundës) ishin vetëm për IBV.
Dizajni i studimit klinik.Një total prej 36 mostrash, duke përfshirë 18 mostra pacientësh dhe 18 kontrolle jo-grip, u analizuan duke përdorur platformën FAST-POCT dhe RT-PCR konvencionale.b Vlerësoni konsistencën analitike midis FAST-POCT PCR dhe RT-PCR konvencionale.Rezultatet kishin korrelacion pozitiv (Pearson r = 0.90).c Nivelet e intensitetit të fluoreshencës në 18 pacientë me IB dhe 18 kontrolle.d Në pacientët me IB (+), vlerat e FL ishin dukshëm më të larta se në grupin e kontrollit (-) (****P = 3.31 × 10-19; T-test me dy bishta; n = 36).Për çdo parcelë katrore, shënuesi i zi në qendër përfaqëson mesataren, dhe vijat e poshtme dhe të sipërme të kutisë përfaqësojnë përkatësisht përqindjen e 25-të dhe të 75-të.Mustaqet shtrihen në pikat minimale dhe maksimale të të dhënave, të cilat nuk konsiderohen të jashtme.e kurba ROC.Vija me pika d paraqet vlerën e pragut të vlerësuar nga analiza ROC.AUC për IBV është 1. Të dhënat e papërpunuara ofrohen si skedarë të të dhënave të papërpunuara.
Në këtë artikull, ne paraqesim FAST, i cili ka karakteristikat e kërkuara për një POCT ideal.Përparësitë e teknologjisë sonë përfshijnë: (1) Dozimi i gjithanshëm (kaskadë, i njëkohshëm, sekuencial dhe selektiv), lirimi sipas kërkesës (lëshimi i shpejtë dhe proporcional i presionit të aplikuar) dhe funksionimi i besueshëm (dridhje në 150 gradë) (2) ruajtje afatgjatë (2 vjet testim të përshpejtuar, humbje peshe rreth 0.3%);(3) aftësia për të punuar me lëngje me një gamë të gjerë lagështie dhe viskoziteti (viskoziteti deri në 5500 cP);(4) Ekonomike (Kostoja e vlerësuar e materialit e pajisjes FAST-POCT PCR është afërsisht 1 USD).Duke kombinuar dispenzuesit multifunksionalë, u demonstrua dhe u aplikua një platformë e integruar FAST-POCT për zbulimin PCR të viruseve të influencës A dhe B.FAST-POCT zgjat vetëm 82 minuta.Testet klinike me 36 mostra të shtupës nazale treguan përputhshmëri të mirë në intensitetin e fluoreshencës me RT-PCR standarde (koeficientët Pearson > 0.9).Testet klinike me 36 mostra të shtupës nazale treguan përputhshmëri të mirë në intensitetin e fluoreshencës me RT-PCR standarde (koeficientët Pearson > 0.9).Клинические тесты со 36 образцами мазков од носа показали хорошее соответствие интензивност флуоресценции стандартной ОТ-ПЦР (koefficentы Pirsona > 0,9).Testet klinike me 36 mostra të tamponëve të hundës treguan përputhje të mirë me intensitetin e fluoreshencës së RT-PCR standarde (koeficientët e Pearson > 0.9). RT-PCR Клинические испытания 36 образцов мазков од носа показали хорошее совпадение интенсивности флуоресценции со стандардной ОТ-ПЦР (koefficient Pirsona > 0,9).Testimi klinik i 36 ekzemplarëve të shtupës nazale tregoi përputhje të mirë të intensitetit të fluoreshencës me RT-PCR standarde (koeficienti Pearson > 0.9).Paralelisht me këtë punë, metoda të ndryshme biokimike në zhvillim (p.sh., ciklimi termik i plazmës, analizat imunologjike pa amplifikim dhe analizat e funksionalizimit të nanotrupave) kanë treguar potencialin e tyre në POCT.Megjithatë, për shkak të mungesës së një platforme POCT plotësisht të integruar dhe të fortë, këto metoda kërkojnë në mënyrë të pashmangshme procedura të veçanta të para-përpunimit (p.sh., izolimi i ARN-së44, inkubimi45 dhe larja46), gjë që plotëson më tej punën aktuale me këto metoda për zbatimin e funksioneve të avancuara POCT me parametrat e kërkuar.performanca e nxjerrjes në përgjigje.Në këtë punë, megjithëse pompa e ajrit që përdoret për të aktivizuar valvulën FAST është mjaft e vogël për t'u integruar në një instrument tavoline (Fig. S9, S10), ajo ende konsumon fuqi të konsiderueshme dhe gjeneron zhurmë.Në parim, pompat pneumatike me faktor më të vogël mund të zëvendësohen me mjete të tjera, të tilla si përdorimi i forcës elektromagnetike ose aktivizimi i gishtit.Përmirësime të mëtejshme mund të përfshijnë, për shembull, përshtatjen e kompleteve për analiza të ndryshme dhe specifike biokimike, duke përdorur metoda të reja zbulimi që nuk kërkojnë sisteme ngrohje/ftohje, duke siguruar kështu një platformë POCT pa mjete për aplikimet PCR.Ne besojmë se duke qenë se platforma FAST ofron një mënyrë për të manipuluar lëngjet, ne besojmë se teknologjia e propozuar FAST paraqet potencialin për të krijuar një platformë të përbashkët jo vetëm për testimin biomjekësor, por edhe për monitorimin mjedisor, testimin e cilësisë së ushqimit, sintezën e materialit dhe ilaçeve. ..
Mbledhja dhe përdorimi i ekzemplarëve të shtupës së hundës njerëzore është miratuar nga Komiteti i Etikës i Spitalit të Parë të Bashkuar të Universitetit Zhejiang (IIT20220330B).U mblodhën 36 mostra të shtupës së hundës, duke përfshirë 16 të rritur < 30 vjeç, 7 të rritur > 40 vjeç dhe 19 meshkuj, 17 femra.U mblodhën 36 mostra të shtupës së hundës, duke përfshirë 16 të rritur < 30 vjeç, 7 të rritur > 40 vjeç dhe 19 meshkuj, 17 femra.Было собрано 36 образцов мазков од носа, в которых приняли участие 16 взрослых < 30 vjeç, 7 vjet më shumë se 40 vjeç, 19 burra dhe 17 gra.Tridhjetë e gjashtë ekzemplarë të shtupës nazale u mblodhën nga 16 të rritur < 30 vjeç, 7 të rritur mbi 40 vjeç, 19 burra dhe 17 gra.Të dhënat demografike janë paraqitur në tabelën plotësuese 3. Pëlqimi i informuar është marrë nga të gjithë pjesëmarrësit.Të gjithë pjesëmarrësit dyshohej se kishin grip dhe u testuan vullnetarisht pa kompensim.
Baza dhe kapaku FAST janë bërë nga acidi polilaktik (PLA) dhe printohen nga printeri 3D Ender 3 Pro (Shenzhen Transcend 3D Technology Co., Ltd.).Shirit me dy anë u ble nga Adhesives Research, Inc. Model 90880. Filmi PET 100 µm i trashë u ble nga McMaster-Carr.Si ngjitësi ashtu edhe filmi PET u prenë duke përdorur prerësin Silhouette Cameo 2 nga Silhouette America, Inc. Filmi elastik është bërë nga materiali PDMS me derdhje me injeksion.Së pari, një kornizë PET me trashësi 200 μm u pre duke përdorur një sistem lazer dhe u ngjit në një fletë PMMA 3 mm të trashë duke përdorur shirit ngjitës të dyanshëm 100 μm.Pararendësi PDMS (Sylgard 184; Pjesa A: Pjesa B = 10:1, Dow Corning) u derdh më pas në kallëp dhe një shufër qelqi u përdor për të hequr PDMS-në e tepërt.Pas tharjes në 70°C për 3 orë, filmi PDMS me trashësi 300 μm mund të hiqet nga kallëpi.
Fotografitë për shpërndarje të gjithanshme, publikim sipas kërkesës dhe performancë të besueshme merren me një aparat fotografik me shpejtësi të lartë (Sony AX700 1000 fps).Shakeri orbital i përdorur në testin e besueshmërisë është blerë nga SCILOGEX (SCI-O180).Presioni i ajrit gjenerohet nga një kompresor ajri dhe disa rregullatorë dixhitalë të saktë të presionit përdoren për të rregulluar vlerën e presionit.Procesi i testimit të sjelljes së rrjedhës është si më poshtë.Një sasi e paracaktuar lëngu u injektua në pajisjen e provës dhe një kamerë me shpejtësi të lartë u përdor për të regjistruar sjelljen e rrjedhës.Imazhet e palëvizshme u morën më pas nga videot e sjelljes së rrjedhës në kohë fikse dhe zona e mbetur u llogarit duke përdorur softuerin Image-Pro Plus, i cili më pas u shumëzua me thellësinë e kamerës për të llogaritur volumin.Detajet e sistemit të testimit të sjelljes së rrjedhës mund të gjenden në figurën plotësuese S4.
Injektoni 50 µl mikrorruaza dhe 100 µl ujë të dejonizuar në pajisjen e përzierjes së shishkës.Fotografitë e performancës së përzier u bënë me një aparat fotografik me shpejtësi të lartë çdo 0,1 sekonda në presione prej 0,1 bar, 0,15 bar dhe 0,2 bar.Informacioni i pikselit gjatë procesit të përzierjes mund të merret nga këto imazhe duke përdorur softuerin e përpunimit të fotografive (Photoshop CS6).Dhe efikasiteti i përzierjes mund të arrihet me ekuacionin 53 të mëposhtëm.
ku M është efikasiteti i përzierjes, N është numri total i pikselave të mostrës dhe ci dhe \(\bar{c}\) janë përqendrimet e normalizuara dhe të pritshme të normalizuara.Efikasiteti i përzierjes varion nga 0 (0%, i papërzier) në 1 (100%, plotësisht i përzier).Rezultatet janë paraqitur në figurën plotësuese S6.
Kompleti RT-PCR në kohë reale për IAV dhe IBV, duke përfshirë mostrat e ARN-së IAV dhe IBV (nr. kat. RR-0051-02/RR-0052-02, Liferiver, Kinë), buferi Tris-EDTA (buferi TE nr. B541019 , Sangon Biotech, Kinë), Kompleti i Purifikimit të ARN-së për Kontrollin Pozitiv (Pjesa Nr. Z-ME-0010, Liferiver, Kinë) dhe Solucioni GAPDH (Nr. Pjesa M591101, Sangon Biotech, Kinë) janë të disponueshme në treg.Kompleti i pastrimit të ARN-së përfshin një tampon lidhës, larje A, larje W, eluent, mikrorruaza magnetike dhe një mbajtës akrilik.Kompletet RT-PCR të IAV dhe IBV në kohë reale përfshijnë përzierjen e zbulimit të PCR të acidit nukleik IFVA dhe enzimën RT-PCR.Shtoni 6 µl AcrylCarrier dhe 20 µl rruaza magnetike në 500 µl tretësirë tampon lidhës, tundeni mirë dhe më pas përgatiteni tretësirën e rruazës.Shtoni 21 ml etanol në lavatriçe A dhe W, tundeni mirë që të përftohen tretësira të larjeve A dhe W, përkatësisht.Më pas, 18 μl përzierje PCR fluoreshente me acid nukleik IFVA dhe 1 μl enzimë RT-PCR u shtuan në 1 μl tretësirë TE, u tundën dhe u centrifuguan për disa sekonda, duke përftuar 20 μl abetare IAV dhe IBV.
Ndiqni procedurën e mëposhtme të pastrimit të ARN-së: (1) Adsorbimi i ARN-së.Hidhni me pipetë 526 µl të tretësirës së peletit në një tub centrifuge 1,5 ml dhe shtoni 150 µl kampion, më pas tundeni manualisht tubin lart e poshtë 10 herë.Transferoni 676 µl të përzierjes në kolonën e afinitetit dhe centrifugoni në 1,88 x 104 g për 60 sekonda.Kullimet e mëvonshme më pas hidhen.(2) Faza e parë e larjes.Shtoni 500 µl tretësirë larëse A në kolonën e afinitetit, centrifugoni në 1,88 x 104 g për 40 s dhe hidhni tretësirën e shpenzuar.Ky proces larje u përsërit dy herë.(3) faza e dytë e larjes.Shtoni 500 µl tretësirë larës W në kolonën e afinitetit, centrifugoni në 1,88×104 g për 15 s dhe hidhni tretësirën e shpenzuar.Ky proces larje u përsërit dy herë.(4) Elucioni.Shtoni 200 µl eluat në kolonën e afinitetit dhe centrifugoni në 1,88 x 104 g për 2 min.(5) RT-PCR: Eluati u injektua në 20 μl të tretësirës së primerit në një tub PCR, më pas tubi u vendos në një aparat testimi PCR në kohë reale (SLAN-96P) për të kryer procesin RT-PCR.I gjithë procesi i zbulimit zgjat afërsisht 140 minuta (20 minuta për pastrimin e ARN-së dhe 120 minuta për zbulimin e PCR).
526 µl tretësirë rruaza, 1000 µl tretësirë larës A, 1000 µl tretësirë larës W, 200 µl eluat dhe 20 µl tretësirë primer u shtuan paraprakisht dhe u ruajtën në dhomat M, W1, W2, E dhe PCR.Montimi i platformës.Më pas, 150 µl e kampionit u hodhën me pipetë në dhomën M dhe platforma FAST-POCT u fut në instrumentin e provës të paraqitur në figurën plotësuese S9.Pas rreth 82 minutash, rezultatet e testit ishin të disponueshme.
Përveç nëse shënohet ndryshe, të gjitha rezultatet e testit paraqiten si mesatare ± SD pas një minimumi prej gjashtë përsëritjesh duke përdorur vetëm platformën FAST-POCT dhe mostra biologjikisht të pavarura.Asnjë e dhënë nuk u përjashtua nga analiza.Eksperimentet nuk janë të rastësishme.Studiuesit nuk ishin të verbër ndaj detyrave në grup gjatë eksperimentit.
Për më shumë informacion mbi hartimin e studimit, shihni abstraktin e Raportit të Kërkimit të Natyrës të lidhur me këtë artikull.
Të dhënat që mbështesin rezultatet e këtij studimi janë në dispozicion në informacionin plotësues.Ky artikull ofron të dhënat origjinale.
Përforcuesit e Chagla, Z. & Madhukar, P. COVID-19 në vendet e pasura do të vonojnë vaksinat për të gjithë.Përforcuesit e Chagla, Z. & Madhukar, P. COVID-19 në vendet e pasura do të vonojnë vaksinat për të gjithë.Përforcuesit e Chagla, Z. dhe Madhukar, P. COVID-19 në vendet e pasura do të vonojnë vaksinat për të gjithë.Chagla, Z. dhe Madhukar, P. Rivaksinimi ndaj COVID-19 në vendet e pasura do ta vonojë vaksinimin për të gjithë.Mjekësi kombëtare.27, 1659–1665 (2021).
Faust, L. et al.Testimi i SARS-CoV-2 në vendet me të ardhura të ulëta dhe të mesme: disponueshmëria dhe përballueshmëria në sektorin privat të kujdesit shëndetësor.infeksion mikrobik.22, 511–514 (2020).
Organizata Botërore e Shëndetësisë.Prevalenca globale dhe incidenca e infeksioneve të përzgjedhura të shërueshme seksualisht të transmetueshme: një përmbledhje dhe vlerësime.Gjenevë: WHO, WHO/HIV_AIDS/2 https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/66818/WHO_HIV_AIDS_2001.02.pdf (2001).
Fenton, EM et al.Shirita të shumtë testues të rrjedhës anësore të formuar 2D.Aplikimi ASS.alma mater.Inter Milan.1, 124–129 (2009).
Schilling, KM et al.Pajisja e analizës mikrofluidike plotësisht e mbyllur me bazë letre.anusit.Kimike.84, 1579–1585 (2012).
Lapenter, N. et al.Imunokromatografia konkurruese me bazë letre e shoqëruar me elektroda të modifikuara me enzimë lejon monitorimin me valë dhe përcaktimin elektrokimik të kotininës urinar.Sensorët 21, 1659 (2021).
Zhu, X. et al.Kuantifikimi i biomarkerëve të sëmundjes me një platformë të gjithanshme të lëngut anësor të integruar me nanozimë duke përdorur një glukometër.sensor biologjik.Bioelektronika.126, 690–696 (2019).
Boo, S. et al.Shirit testimi të shtatzënisë për zbulimin e baktereve patogjene duke përdorur nanolule hibride konkanavalin A-gonadotropinë korionike njerëzore-Cu3(PO4)2, ndarje magnetike dhe lexim telefoni inteligjent.Mikrokompjuter.Revistë.185, 464 (2018).